Proizvodi

Topologija membrane domene kolicinskog E1 kanala proučavana je fluorescentnim rezonantnim prijenosom energije (FRET).FRET je uključivao genetski kodiranu fluorescentnu aminokiselinu (kumarin) kao donora i selektivno obilježeni cisteinski ostatak vezan s DABMI (4-(dimetilamino)fenilazofenil-4'-maleimid) kao FRET akceptor.Ostatak fluorescentnog kumarina ugrađen je u protein preko ortogonalnog para tRNA/aminoacil-tRNA sintetaze koji je omogućio selektivnu ugradnju u bilo koje mjesto unutar domene kolicinskog kanala.Svaka varijanta sadržavala je stop (TAG) mutaciju za inkorporaciju kumarina i cisteinsku (TGT) mutaciju za pričvršćivanje DABMI.Šest interhelikalnih udaljenosti unutar spirala 1-6 određeno je pomoću FRET analize i za topljivo i za membransko vezano stanje.Podaci FRET-a pokazali su velike promjene u međuhelikalnim udaljenostima između zavojnica 3-6 nakon povezivanja s membranom dajući novi uvid u membranski vezanu strukturu domene kanala.Općenito, međuhelikalne učinkovitosti kumarin-DABMI FRET smanjile su se nakon vezanja na membranu, nadovezujući se na krovni model za kolicinski kanal.Probni model za zatvoreno stanje domene kanala razvijen je na temelju trenutnih i prethodno objavljenih FRET podataka.Model sugerira kružni raspored spirala 1-7 u smjeru kazaljke na satu s izvanstanične strane i međufaznu povezanost membrane spirala 1, 6, 7 i 10 oko središnje transmembranske ukosnice koju tvore spirale 8 i 9.