Proizvodi

1. Metode profiliranja metabolita važan su alat za mjerenje količine metabolita u biološkim sustavima.Dok većina metoda profiliranja metabolita izvještava o relativnom intenzitetu ili ovisi o nekoliko internih standarda koji predstavljaju sve metabolite, krajnji zahtjev za kvantitativni opis skupa metabolita u biološkim stanicama i tekućinama je određivanje apsolutne koncentracije.Ovdje izvještavamo o visokoučinkovitoj i osjetljivoj plinskoj kromatografiji/tandemskoj masenoj spektrometriji (GC/MS/MS) ciljanoj metodi profiliranja metabolita koja omogućuje apsolutnu kvantifikaciju svih otkrivenih metabolita.Metoda se temelji na derivatizaciji metil kloroformijata i kvantifikaciji dodavanjem uzoraka standardima metabolita koji su zasebno derivatizirani deuteriranim derivatizacijskim reagensima.Tradicionalna ionizacija udarom elektrona zamijenjena je pozitivnom kemijskom ionizacijom budući da potonja u mnogo većoj mjeri čuva molekularne ione i druge fragmente velike molekularne težine.To je olakšalo odabir jedinstvenih MS/MS prijelaza među mnogim koeluirajućim metabolitima.Trenutno, nova GC/MS/MS metoda uključuje 67 uobičajenih primarnih metabolita od kojih većina pripada skupinama amino i neamino organskih kiselina.Primjenjivost metode prikazujemo na uzorcima urina i seruma.Metoda je značajno poboljšanje postojeće metodologije za kvantitativno GC/MS profiliranje metabolita aminokiselina i neamino organskih kiselina.

2,24S-hidroksikolesterol (24OHC) i 27-hidroksikolesterol (27OHC) dva su strukturno slična oksisterola različitog podrijetla - prvi gotovo isključivo nastaje u mozgu, a drugi se stvara u manjoj mjeri u mozgu nego u većini drugih organa.HIPOTEZA KOJU TREBA ISPITIVATI: Oštećenje neurona i/ili demijelinizacija uzrokuje povećan protok 24OHC iz mozga u cerebrospinalnu tekućinu (CSF), dok defekt krvno-moždane barijere uzrokuje povećani protok 27OHC iz cirkulacije u CSF. Razrjeđenje izotopa-masa spektrometrija je korištena za analizu dvaju oksisterola u CSF-u i plazmi više od 250 pacijenata s različitim neurološkim i gerijatrijskim bolestima. Razine dvaju oksisterola u CSF-u mnogo su više pod utjecajem različitih bolesti nego razine u plazmi.Bolesnici s aktivnim demijelinizirajućim bolestima imali su povećane razine 24OHC u likvoru s relativno visokim omjerom 24OHC/27OHC.Pacijenti s meningitisom općenito su imali visoke razine oba steroida s niskim omjerom 24OHC/27OHC.Pacijenti s Alzheimerovom bolešću imali su blago povećane razine 24OHC u likvoru s manjim povećanjem 27OHC.Pacijenti s multiplom sklerozom imali su tendenciju viših razina 24OHC tijekom aktivnih razdoblja s visokim omjerom 24OHC/27OHC. Mjerenja dvaju oksisterola u likvoru i plazmi mogu značajno doprinijeti postojećim biokemijskim metodama za procjenu neuroloških bolesti.