Proizvodi

Slično drugim virusima RNK s pozitivnim lancem, tombusvirusi se repliciraju putem membranski vezanog kompleksa virusne replikaze (VRC).VRC se sastoji od p92 virusom kodirane RNA ovisne RNA polimeraze (RdRp), virusnog p33 RNA šaperona i nekoliko kooptiranih proteina domaćina.Kako bi postao funkcionalni RdRp nakon svoje translacije, p92 replikacijski protein treba biti ugrađen u VRC, nakon čega slijedi njegova aktivacija.Prethodno smo pokazali u testu temeljenom na ekstraktu kvasca bez stanica da aktivacija RdRp virusa Tomato bushy stunt (TBSV) zahtijeva topivi faktor(e) domaćina.U ovom članku identificirali smo stanični protein toplinskog šoka 70 (Hsp70) kao kooptirani faktor domaćina potreban za aktivaciju N-terminalno skraćenog rekombinantnog TBSV RdRp.Osim toga, blokiranje funkcije Hsp70 na bazi malih molekula inhibira sintezu RNK od strane tombusvirusa RdRp in vitro.Nadalje, pokazujemo da neutralni fosfolipidi, naime fosfatidiletanolamin (PE) i fosfatidilkolin (PC), pojačavaju aktivaciju RdRp in vitro.Nasuprot tome, fosfatidilglicerol (PG) pokazuje snažan i dominantan inhibitorni učinak na in vitro RdRp aktivaciju.Također pokazujemo da PE i PC stimuliraju interakciju RdRp-virusne plus-lančane RNA [(+)RNA], dok PG inhibira vezanje virusne RNA na RdRp.Na temelju stimulativne naspram inhibitorne uloge različitih fosfolipida u RdRp aktivaciji tombusvirusa, predlažemo da tombusvirusi mogu iskoristiti lipidni sastav ciljanih subcelularnih membrana za regulaciju sklapanja novog VRC-a tijekom infekcije. Virusom kodirana RNA ovisna RNA polimeraza (RdRp), koji je odgovoran za sintetiziranje virusnog RNA potomstva u inficiranim stanicama nekoliko pozitivnih RNA virusa, u početku je neaktivan.Ova strategija će vjerojatno izbjeći sintezu virusne RNA u citosolu koja bi brzo dovela do indukcije staničnih antivirusnih odgovora izazvanih RNA.Tijekom sastavljanja membranski vezanog kompleksa replikaze, virusni RdRp postaje aktiviran kroz nepotpuno shvaćen proces koji čini RdRp sposobnim za sintezu RNA.Korištenjem TBSV RdRp, pokazujemo da kooptirani stanični Hsp70 šaperon i neutralni fosfolipidi olakšavaju aktivaciju RdRp in vitro.Nasuprot tome, fosfatidilglicerol (PG) ima dominantan inhibitorni učinak na in vitro RdRp aktivaciju i RdRp-virusnu RNA interakciju, što sugerira da membranska mikrodomena koja okružuje RdRp uvelike utječe na njegovu sposobnost sinteze RNA.Prema tome, aktivacija virusnog RdRp vjerojatno ovisi o više komponenti domaćina u zaraženim stanicama.