Proizvodi

Novo ispitivanje tekućinskom kromatografijom visoke učinkovitosti za glikoziltransferaze koje se temelji na derivatizaciji antranilnom kiselinom i detekciji fluorescencije.

Testovi su razvijeni korištenjem jedinstvene kemije označavanja 2-aminobenzojeve kiseline (2AA; antranilna kiselina, AA) za mjerenje aktivnosti i β1-4 galaktoziltransferaze (GalT-1) i α2-6 sialiltransferaze (ST-6) tekućinom visokih performansi kromatografija (HPLC) s detekcijom fluorescencije (Anumula KR. 2006. Napredak u metodama fluorescentne derivatizacije za analizu tekućinskom kromatografijom visoke učinkovitosti glikoproteinskih ugljikohidrata. Anal Biochem. 350:1-23).N-acetilglukozamin (GlcNAc) i N-acetillaktozamin korišteni su kao akceptori, a uridindifosfat (UDP)-galaktoza i citidinmonofosfat (CMP)-N-acetilneuraminska kiselina (NANA) kao donori za GalT-1 odnosno ST-6.Enzimski produkti obilježeni su in situ s AA i odvojeni su od supstrata na koloni TSKgel Amide 80 u uvjetima normalne faze.Enzimske jedinice određene su iz područja pikova usporedbom s istodobno derivatiziranim standardima Gal-β1-4GlcNAc i NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc.Utvrđena je linearnost (vrijeme i koncentracija enzima), preciznost (unutar i između ispitivanja) i ponovljivost za analize.Utvrđeno je da su testovi korisni u praćenju aktivnosti enzima tijekom izolacije i pročišćavanja.Testovi su bili vrlo osjetljivi i izvedeni jednako ili bolje od tradicionalnih mjerenja na bazi radioaktivnog šećera.Format testa također se može koristiti za mjerenje aktivnosti drugih transferaza, pod uvjetom da akceptori ugljikohidrata sadrže redukcijski kraj za označavanje.Test za akceptore glikoproteina razvijen je pomoću IgG.Razvijena je kratka HPLC metoda profiliranja za odvajanje IgG glikana (biantenarnih G0, G1, G2, mono- i disijaliranih), što je omogućilo brzo određivanje aktivnosti GalT-1 i ST-6.Nadalje, ova bi se metoda profiliranja trebala pokazati korisnom za praćenje promjena IgG glikana u kliničkim uvjetima.