Proizvodi

Diferencijacija orbitalnih fibroblasta u zrele adipocite i kasnije nakupljanje masnog tkiva prikazano je u progresiji Gravesove orbitopatije (GO).Autofagija je uključena u adipogenezu, ali malo se zna o ulozi autofagije u inicijaciji i napredovanju GO.Cilj ovog istraživanja je istražiti ulogu autofagije u patogenezi GO. Analizirani su eksplantati orbitalnog masnog/vezivnog tkiva bolesnika s GO i zdravih osoba, kao i izolirani orbitalni fibroblasti.Adipogeneza je inducirana pomoću medija za diferenciranje sa ili bez vodikovog peroksida, a autofagija je manipulirana korištenjem bafilomicina A1 i Atg5-ciljane kratke ukosnice RNA (shRNA).Autofagosomi su identificirani elektronskom mikroskopijom.Ekspresija gena povezanih s autofagijom i faktora transkripcije povezanih s adipogenezom analizirani su lančanom reakcijom polimeraze reverzne transkripcije u stvarnom vremenu i/ili Western blot analizom.Nakupljanje kapljica lipida ispitano je bojenjem Oil Red O. Autofagne vakuole bile su zastupljenije u GO stanicama nego u ne-GO stanicama (p<0,05).Ekspresija gena povezanih s autofagijom bila je značajno veća u GO tkivima i stanicama nego u njihovim ne-GO pandanima.Interleukin-1β povećao je LC3-II, p62 i Atg7 protein u GO stanicama.Akumulacija autofagosoma prikazana je 4. dana adipogeneze i smanjena do 10. dana, zajedno sa stvaranjem lipidnih kapljica.Ekspresija proteina LC3 i p62 porasla je unutar 48 sati od diferencijacije i postupno se smanjivala od 4. do 10. dana. Liječenje bafilomicinom A1 i obaranje Atg5 pomoću shRNA inhibiralo je nakupljanje kapljica lipida i potisnulo izražavanje adipogenih markera. Autofagija je povećana u GO tkivu i stanicama u usporedbi s ne-GO tkiva i stanica, što sugerira da autofagija igra ulogu u patogenezi GO.Manipulacija autofagijom može biti terapeutski cilj za GO.