Proizvodi

Poboljšano iskorištavanje dušika kod goveda važno je kako bi se osigurala održiva govedarska proizvodnja.Budući da purini i pirimidini (PP) čine znatan dio dušika buraga, neophodno je bolje razumijevanje apsorpcije i posrednog metabolizma PP.Ovaj rad opisuje razvoj i validaciju osjetljive i specifične metode za istovremeno određivanje 20 purina (adenin, gvanin, gvanozin, inozin, 2'-deoksigvanozin, 2'-deoksiinozin, ksantin, hipoksantin), pirimidina (citozin, timin, uracil, citidin, uridin, timidin, 2'-deoksiuridin), te produkti njihove razgradnje (mokraćna kiselina, alantoin, β-alanin, β-ureidopropionska kiselina, β-aminoizomaslačna kiselina) u krvnoj plazmi mliječnih krava.Tehnika bazirana na tekućinskoj kromatografiji visoke učinkovitosti spojena s elektrosprej ionizacijskom tandemskom masenom spektrometrijom (LC-MS/MS) kombinirana je s individualnim kalibracijskim standardima usklađenim s matricom i stabilnim izotopski obilježenim referentnim spojevima.Kvantitativnoj analizi prethodio je novi postupak predtretmana koji se sastojao od taloženja etanolom, filtracije, isparavanja i rekonstitucije.Istraženi su parametri za odvajanje i detekciju tijekom LC-MS/MS analize.Potvrđeno je da je korištenje logaritamskog kalibracijskog modela umjesto linearnog kalibracijskog modela rezultiralo nižim CV%, a nedostatak testa prilagodbe pokazao je zadovoljavajuću linearnu regresiju.Metoda pokriva raspone koncentracija za svaki metabolit u skladu s onima u stvarnim uzorcima, npr. gvanin: 0,10-5,0 μmol/L, a alantoin: 120-500 μmol/L.CV% za odabrane raspone kvantifikacije bio je ispod 25%.Metoda ima dobru ponovljivost (CV%≤25%) i srednju preciznost (CV%≤25%) te izvrsna iskorištenja (91-107%).Svi su metaboliti pokazali dobru dugotrajnu stabilnost i dobru stabilnost unutar ciklusa (CV%≤10%).U plazmi, urinu i mlijeku primijećeni su različiti stupnjevi apsolutnih učinaka matriksa.Određivanje relativnih učinaka matrice pokazalo je da je metoda prikladna za gotovo sve ispitivane metabolite PP u plazmi izvučene iz arterije i portalne hepatične, jetrene i gastrospleničke vene te, uz nekoliko iznimaka, također i za druge vrste kao što su piletina, svinja, mink, čovjek i štakor.