Proizvodi

Beta-D-2'-deoksi-2'-fluor-2'-C-metilcitidin (PSI-6130) snažan je specifični inhibitor sinteze RNK virusa hepatitisa C (HCV) u stanicama replikona Huh-7.Za inhibiciju HCV NS5B RNA polimeraze, PSI-6130 mora biti fosforiliran u 5'-trifosfatni oblik.Istraživana je fosforilacija PSI-6130 i inhibicija HCV NS5B.Fosforilacija PSI-6130 pomoću rekombinantne humane 2'-deoksicitidin kinaze (dCK) i uridin-citidin kinaze 1 (UCK-1) mjerena je pomoću spojene spektrofotometrijske reakcije.Pokazalo se da je PSI-6130 supstrat za pročišćeni dCK, s Km od 81 mikroM i kcat od 0,007 s-1, ali nije bio supstrat za UCK-1.PSI-6130 monofosfat (PSI-6130-MP) učinkovito je fosforiliran u difosfat, a zatim u trifosfat pomoću rekombinantne ljudske UMP-CMP kinaze odnosno nukleozid difosfat kinaze.Proučavana je inhibicija divljeg tipa i mutiranih (S282T) HCV NS5B RNA polimeraza.Konstanta inhibicije u stabilnom stanju (Ki) za PSI-61 30 trifosfat (PSI-6130-TP) s divljim tipom enzima bila je 4,3 mikroM.Slični rezultati dobiveni su s 2'-C-metiladenozin trifosfatom (Ki=1,5 mikroM) i 2'-C-metilcitidin trifosfatom (Ki=1,6 mikroM).NS5B s mutacijom S282T, za koju je poznato da daje otpornost na 2'-C-metiladenozin, bio je inhibiran s PSI-6130-TP jednako učinkovito kao i divlji tip.Ugradnja PSI-6130-MP u RNA katalizirana pročišćenom NS5B RNA polimerazom rezultirala je prekidom lanca.