Proizvodi

Oksidativno oštećenje baza DNA obično rezultira stvaranjem oksidiranih purina, osobito 7,8-dihidro-8-oksoguanina (8-oxoG) i 7,8-dihidro-8-oksoadenina (8-oxoA), pri čemu je prvi dobro poznata mutagena lezija.Budući da je 8-oxoG lako podložan daljnjoj oksidaciji u usporedbi s normalnim bazama, umetanje baze tijekom sinteze DNA nasuprot oksidiranom obliku 8-oxoG istraženo je in vitro.Sintetski predložak koji sadrži jednu 8-oxoG leziju prvo je tretiran s različitim jednoelektronskim oksidansima ili pod uvjetima singletnog kisika, a zatim je podvrgnut ekstenziji primera kataliziranoj Klenowovim fragmentom exo- (Kf exo-), polimerazom alfa DNK telećeg timusa (pol alfa ) ili ljudska DNA polimeraza beta (pol beta).U skladu s prethodnim izvješćima, dAMP i dCMP su umetnuti selektivno nasuprot 8-oxoG sa sve tri DNA polimeraze.Zanimljivo, otkriveno je da oksidacija 8-oxoG inducira umetanje dAMP i dGMP nasuprot lezije putem Kf exo- s prolaznom inhibicijom ekstenzije primera koja se javlja na mjestu modificirane baze.Nadalje, lezija predstavlja blokadu tijekom sinteze DNA pol alfa i pol beta.Eksperimenti s 8-oksoA-modificiranim šablonskim oligonukleotidom pokazuju da i 8-oksoA i oksidirani oblik 8-oksoA izravno umeću dTMP pomoću Kf exo-.Masena spektrometrijska analiza oligonukleotida koji sadrže 8-oxoG prije i nakon oksidacije s IrCl62-sukladna je s oksidacijom primarno 8-oxoG mjesta, što rezultira stvaranjem gvanidinohidantoinske jedinice kao glavnog produkta.Nisu dobiveni dokazi o formiranju abazičnih mjesta.Ovi rezultati pokazuju da oksidirani oblik 8-oxoG, vjerojatno gvanidinohidantoin, može usmjeriti pogrešno čitanje i pogrešno umetanje dNTP-a tijekom sinteze DNA.Ako bi se takav proces dogodio in vivo, to bi predstavljalo točkastu mutagenu leziju koja dovodi do G-->T i G-->C transverzija.Međutim, odgovarajući oksidirani oblik 8-oksoA prvenstveno pokazuje ispravno umetanje T tijekom sinteze DNA s Kf exo-.