Proizvodi

Monogalaktopiranozidi fluoresceina i fluorescein metil estera: sinteza, enzimska hidroliza biotniliranom β-galaktozidazom i određivanje koeficijenta translacijske difuzije

Fluorescein monoglikozidi (d-galaktopiranozid (FMG) i d-glukopiranozid) i njihov metil ester (MFMG) pripremljeni su iz acetobromoglukoze/galaktoze i fluorescein metil estera u dobrim prinosima.Provedeni su eksperimenti enzimske hidrolize (upotrebom biotinilirane β-galaktozidaze) galakto derivata i izračunati su kinetički parametri.Tijekom hidrolize primijećeno je 15-20 puta povećanje intenziteta fluorescencije.Primijećeno je linearno povećanje fluorescencije u kratkom vremenu i niskoj koncentraciji supstrata, što ove spojeve čini korisnim i osjetljivim probama za galaktozidaze.Veličina Michaelis-Mentenove konstante (Km) za MFMG veća je od one za FMG što ukazuje na moguću konformacijsku promjenu fluorogenog supstrata.Vrijednost Km za biotinilirani β-Gal s FMG niža je od one za nativni enzim.Ovo opažanje ukazuje na viši afinitet biotiniliranog enzima prema supstratu u usporedbi s nativnim enzimom.Koeficijenti translacijske difuzije izmjereni su, za oba fluorogena supstrata i za oba proizvoda, primjenom korelacijske spektroskopije fluorescencije.Izmjereno je da su koeficijenti translacijske difuzije za fluorogene supstrate i proizvode enzimske hidrolize slični, u rasponu od 3,5–4,5 × 10−10 m2 s−1.Stoga pojačanje ili usporavanje enzimske kinetike zbog razlike u translacijskoj mobilnosti supstrata i produkta nije toliko vidljivo.