Proizvodi

Jedan od čimbenika koji sprječava kliničku primjenu regenerativne medicine na degenerativne bolesti hrskavice je prikladan izvor stanica.Hondrociti, jedini stanični tip hrskavice, uzgojeni in vitro u uvjetima kulture kako bi se povećao broj stanica, gube svoj fenotip zajedno sa sposobnošću stvaranja hijalinskog hrskavičnog tkiva.U ovoj studiji utvrđujemo da trodimenzionalni (3D) sustav kulture bez seruma i faktora rasta vraća sposobnost pasiranih kondrocita da tvore tkivo hrskavice in vitro, proces koji uključuje sox9. Goveđi zglobni hondrociti pasirani su dva puta do omogućuju povećanje broja stanica (P2) i uzgajaju se pri visokoj gustoći na 3D membranama obloženim kolagenom tipa II u mediju s visokim sadržajem glukoze s dodatkom inzulina i deksametazona (SF3D).Stanice su karakterizirane nakon jednoslojne ekspanzije i praćenja 3D kulture protočnom citometrijom, ekspresijom gena i histologijom.Karakterizirane su rane promjene u putevima prijenosa signala tijekom rediferencijacije. P2 stanice su pokazale profil antigena sličan progenitoru od 99% CD44(+) i 40% CD105(+) i profil ekspresije gena koji ukazuje na međuzonske stanice.P2 u SF3D eksprimirao je hondrogene gene i akumulirao izvanstanični matriks.Smanjena regulacija inzulinskog receptora (IR) s HNMPA-(AM3) ili PI-3/AKT kinaznog puta (aktiviranog liječenjem inzulinom) s Wortmanninom inhibirala je sintezu kolagena.HNMPA-(AM3) je smanjio ekspresiju Col2, Col11 i IR gena kao i Sox6 i -9.Analize koimunoprecipitacije i imunoprecipitacije kromatina stanica tretiranih HNMPA-(AM3) pokazale su vezanje koaktivatora Sox6 i Med12 sa Sox9, ali smanjeno vezanje Sox9-Col2a1. Opisujemo novu metodu kulture koja omogućuje povećanje broja kondrocita i potiče formiranje hrskavičnog tkiva sličnog hijalinu djelomično inzulinom posredovanim vezanjem Sox9-Col2a1.Prikladnost tkiva generiranog ovim pristupom za upotrebu u popravku zglobova treba ispitati in vivo.